由于在纽约自然历史博物馆担任警卫有出色表现,拉瑞(本?斯蒂勒 Ben Stiller 饰)出任某家电小公司的CEO,而且还在电视上接受了著名脱口秀主持人的访谈,儿子对他仰慕,爱情如影随形,一派笑容可掬的样子。不过,好景不长,当他故地重游,却意外发现馆长已经因为经营惨淡准备关门大吉了。所有的藏品正在装箱,准备挪到华盛顿的史密森博物馆继续展出。这让拉瑞感到有些气愤,他觉得自己有责任重振博物馆之雄风,于是他决定留下来再做一晚警卫,以唤起那些老朋友的和衷共济。事实上,在搞定了罗斯福(罗宾?威廉斯 Robin Williams 饰)、林肯、拿破仑、伊凡雷帝和阿尔?卡邦等人之后,他遭遇了一个劲敌——邪恶的古埃及法老的卡门拉,二人在夜晚再度上演了博物馆的惊魂对决……